Techniques de laboratoire

Test d'Ouchterlony. <br />Le puits central (A) contient du sérum de lapin immunisé contre la BSA (Bovine serum albumin). <br />Les autres puits contiennent respectivement du sérum de chèvre (B), de porc (C), de lapin (D), de boeuf (E), de cheval (F) et une solution de BSA (G). <br />On constate la formation d'un arc de précipitation, qui correspond à la formation de complexes immuns, entre le puits central et les puits E et G. <br /><a href='http://svt.enseigne.ac-lyon.fr/spip/spip.php?article196' target='_blank'>Voir la technique</a> [59511 views] Fécondation du colza (<em>Brassica napus</em>) : les tubes polliniques, véhiculant les gamètes mâles, pénètrent dans le tissu de transmission du style, jusqu'à la cavité ovarienne de la fleur d'angiosperme. Ici un tube pollinique révélé par épifluorescence (en blanc), longe la cavité ovarienne puis le funicule et féconde l'ovule anatrope (en rouge). [55392 views] Méduse d'ADN (extrait d'un bulbe d'oignon). <a href='http://svt.enseigne.ac-lyon.fr/spip/spip.php?article192' target='_blank'> Voir la technique d'extraction de l'ADN</a>. [51729 views] ADN d'oignon, coloration de Feulgen. [42434 views] La microscopie confocale permet d'étudier la localisation de différentes protéines dans les cellules. Des cellules PC12 (lignée tumorale dérivée de la crête neurale, chez le Rat) ont été transfectées pour exprimer la cavéoline 1 (protéine permettant de former des vésicules sur les membranes) et TrkA (récepteur du NGF=Nerve Growth Factor). TrkA a la particularité d'être fusionné à la GFP (Green Fluorescent Protein), ce qui permet de le localiser par fluorescence verte. La cavéoline 1 est détectée par un anticorps de lapin suivi d'un anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorochrome rouge. Elle apparaît donc en rouge. Le récepteur à la transferrine est détecté par un anticorps de souris suivi d'un anticorps secondaire anti-souris couplé à un fluorochrome bleu. Il apparaît donc en bleu. Légendes: (A) Le marquage du compartiment endosomal par le récepteur à la transferrine (Tnf-R) apparaît en bleu. (B) Marquage de la cavéoline 1 en rouge. (C) Superposition des marquages Tnf-R et cavéoline 1 ; les zones de colocalisation apparaissent en rose. (D) Localisation subcellulaire de TrkA-GFP révélée par la fluorescence verte de la GFP. (E) Superposition des marquages TrkA-EGFP et cavéoline 1 ; les zones de colocalisation apparaissent en jaune. (F) Superposition des marquages Tnf-R, TrkA-GFP et cavéoline 1 ; les zones de colocalisation apparaissent en blanc. Barre = 5 micron. <BR> L'observation par microscopie confocale montre que la cavéoline 1 et TrkA-GFP sont très largement co-localisés à la fois à la surface cellulaire (pointe de flèche) et à l'intérieur de la cellule (flèche). Le compartiment intracellulaire où se co-localisent la cavéoline 1 et TrkA-GFP est également marqué par un anticorps dirigé contre le récepteur à la transferrine. Le marquage périphérique correspond à des sites particuliers de la membrane plasmique, des filopodes enrichis en actine sous-membranaire. Le marquage intracellulaire correspond aux endosomes précoces et de recyclage, enrichis en récepteur à la transferrine. Des mouvements vésiculaires déplacent TrkA-EGFP entre ces deux localisations cellulaires. On peut noter la présence de 2 cellules (en haut à droite) sans marquage Cavéoline 1. Ces deux cellules n'ont pas été transfectées par le vecteur d'expression de la protéine (la transfection d'une population de cellules n'est jamais efficace à 100%). [46582 views] Hybridation <em>in situ</em> : cette technique permet de déterminer sur une coupe histologique dans quelles cellules s'exprime un gène donné. Pour cela on produit une sonde d'ARN antisens marquée (séquence complémentaire d'une portion d'un ARNm donné), pouvant s'hybrider sur les ARNm issus de la transcription d'un gène de séquence connue. La sonde, hybridée aux ARNm, peut être révélée chimiquement et donne une couleur brune dans les cellules qui expriment le gène donné (en haut à gauche). Ici, il s'agit du gène CCLS6 qui s'exprime spécifiquement dans le tapis des étamines (CT d'anthère) du compagnon blanc (<em>Silene latifolia</em>). Les deux autres figures correspondent aux témoins : (en bas, à gauche) en utilisant une sonde sens sur les mêmes tissus et (à droite) une sonde anti-sens sur d'autres tissus (ici une coupe longitudinale de pistil). [41417 views] Photo de microscopie électronique à balayage montrant deux macrophages de souris et une levure (<em>Saccharomyces cerevisiae</em>). Pour obtenir les macrophages, on a injecté des billes de biogel en sous-cutané à une souris. Il y a formation d'un granulome = réaction immunologique peu intense, les macrophages se rassemblent temporairement autour du matériau inerte qu'ils ne phagocytent pas. Ensuite on dissèque la peau et on récupère le granulome à partir duquel on purifie les macrophages. On dépose les cellules sur une lamelle et on ajoute des levures, ce qui entraîne une activité de phagocytose (cf <a href='https://phototheque.enseigne.ac-lyon.fr/photossql/photos.php?RollID=images&FrameID=macrophage_levures2'>photo suivante</a>). [43187 views] Chromatographie de quelques sucres simples. <a href='http://svt.enseigne.ac-lyon.fr/spip/spip.php?article110' target='_blank'>Page liée</a>. [38297 views] Chromatographie sur couche mince des pigments photosynthétiques du poivron vert. De haut en bas : carotènes, chlorophylle a, chlorophylle b, puis deux xanthophylles (lutéine pour le premier, ? pour l'autre). [40445 views] Mutation portant sur la couleur d'une colonie de levures. [39325 views] Chromatographie de 4 vins en cours de fermentation malo-lactique. <a href='http://svt.enseigne.ac-lyon.fr/spip/spip.php?article112' TARGET='_blank'>Page liée</a> [38504 views] Photo de microscopie électronique à balayage montrant des macrophages de souris et des levures (<em>Saccharomyces cerevisiae</em>). On voit une levure opsonisée, et on devine la forme de trois levures déjà phagocytées par les macrophages. [38887 views] Chromatographie de pigments de feuille d'ortie. [41840 views] Chromatographie sur couche mince de germination de blé à la lumière (à gauche) et à l'obscurité (à droite : absence de la chlorophylle b). [37866 views] Chromatographie sur couche mince d'algue verte (à gauche) et d'algue brune (à droite : peu de chlorophylle b mais présence de fucoxanthine chez ces dernières). [37813 views] Liposomes de lécithine au microscope électronique à transmission (x 60 000). On observe des structures sphériques constituées d'un empilement de feuillets lipidiques analogues à ceux des membranes plasmiques. Les liposomes ont été obtenus après 15 minutes d'agitation magnétique modérée d'une solution de lécithine à 1% dans l'eau distillée. [35197 views] Etalement de <em>Listeria spp.</em> sur de la gélose ALOA (Agar Listeria selon Ottaviani et Agosti). La gélose ALOA est utilisée en analyses alimentaires ou pour tout autre type de prélèvement. Ce milieu est destiné à l'isolement et au dénombrement des <em>Listeria spp.</em>. Sur ce milieu, les <em>Listeria</em> forment des colonies rondes, régulières, de couleur bleue (détection de la bêtaglucosidase grâce à un substrat chromogénique spécifique). [35622 views] Etalement de <em>Salmonella</em> sur de la gélose XLD (Xylose-Lysine-Désoxycholate). La gélose XLD est utilisée pour l'isolement des entérobactéries pathogènes et notamment des <em>Shigella</em> et des <em>Salmonella</em> dans les produits biologiques, pharmaceutiques, alimentaires et dans les eaux. [36127 views] Synthèse d'amidon par le lierre panaché. Une feuille de lierre panaché (comme celle de gauche) exposée à la lumière a été partiellement masquée par une gommette de couleur noire. Après décoloration à l'alcool puis traitement au lugol (image de droite), l'expérience montre que l'amidon est produit seulement sur les portions vertes, ayant été exposées à la lumière. [32647 views] Répartition des particules dans une rivière artificielle après avoir fait couler l'eau dedans. Dans le cristallisoir, l'eau récupérée à la sortie de la rivière. [31836 views] Comparaison de la carotte domestiquée et du panais sauvage. Coloration de la lignine avec du phloroglucinol (Spasfon). Cette coloration rose-violacé, non stable dans le temps, permet de bien distinguer les parois lignifiées des parois non lignifiées. [10866 views] Mise en évidence de l’amylase dans le blé germé. La gélose contient 1% d’amidon qui a été coloré en bleu par du lugol. Sous le grain de blé en germination, la gélose est largement décolorée ce qui indique la disparition de l’amidon. Cette disparition de l’amidon est due à l’activité d’une enzyme, l’amylase, produite par les tissus de la graine. L’hydrolyse de l’amidon par l’amylase libère des sucres simples, comme le maltose et le glucose, ensuite utilisés par la plantule pour sa croissance. [11150 views]

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